Справянето с проби, които имат висока флуоресценция на фона, може да бъде истинска болка във врата, особено когато се опитвате да коригирате ефекта на вътрешния филтър. Като някой, който работи за доставчик на вътрешен филтър, видях от първа ръка предизвикателствата, с които се сблъскват изследователите и учените в тази област. В тази публикация в блога ще се потопя в някои от основните предизвикателства и как нашите продукти могат да ви помогнат да ги преодолеете.
Първо, нека бързо да прегледаме какъв е ефектът на вътрешния филтър. Когато работите с проби в анализ на базата на флуоресценция, ефектът на вътрешния филтър може да обърка нещата голямо време. Той възниква, когато светлината на възбуждане или емисии се абсорбира от самата проба, а не просто взаимодействие с флуорофор, от който се интересувате. Това абсорбция може да доведе до неточни измервания на интензивността на флуоресценция, което затруднява получаването на надеждни данни.
Сега, когато се занимавате с проби, които имат висока фонова флуоресценция, ефектът на вътрешния филтър става още по -голям главоболие. Едно от най -големите предизвикателства е точното количествено определяне на фоновата флуоресценция. Високата флуоресценция на фона може да идва от различни източници, като примеси в пробата, автофлуоресценция на матрицата на пробата или дори бездомната светлина. Измислете каква част от измерената флуоресценция се дължи на фона и колко е от целевия ви флуорофор не е лесна задача.
Друг проблем е, че високата флуоресценция на фона може да усили ефекта на вътрешния филтър. Тъй като има толкова много фонова флуоресценция, в пробата има повече материал, за да абсорбира светлината на възбуждането и емисиите. Това може да причини значително подценяване или надценяване на интензитета на флуоресценция на вашия целеви флуорофор, в зависимост от специфичните условия. И нека бъдем истински, неточните данни могат да изхвърлят целия ви експеримент и да доведат до неправилни заключения.
Един подход за коригиране на ефекта на вътрешния филтър при проби с висока флуоресценция е използването на математически модели. Тези модели обаче често разчитат на предположения за пробата и самия ефект на вътрешния филтър. В проби с висока фонова флуоресценция тези предположения може да не са верни. Например, някои модели приемат, че свойствата на абсорбцията и флуоресценцията на пробата са равномерни, но в действителност високата флуоресценция на фона може да се дължи на локализирани области с висока абсорбция или флуоресценция в пробата. Това може да затрудни точно прилагането на тези модели.
Именно там влизат нашите вътрешни филтри. Ние предлагаме набор от филтри с високо качество, които са проектирани така, че да се справят конкретно с предизвикателствата на високите фонови флуоресцентни проби. Вземете нашитеВъншен филтър DF727 Предаване. Този филтър е проектиран за селективно блокиране на дължините на вълните, свързани с фоновата флуоресценция, като същевременно позволява да преминат дължините на вълните, за да преминат целевия ви флуорофор. Чрез намаляване на фоновата флуоресценция, достигаща до детектора, това помага да се сведе до минимум въздействието на ефекта на вътрешния филтър.
НашитеDTF630 - 0025 - АМ вътрешен филтър дълъг квадрат с магнит 1726302DT000 DTF630 трансмисияе друг страхотен вариант. Той е проектиран със специално покритие и структура, които могат ефективно да филтрират нежелана светлина, дори в проби с изключително висока флуоресценция. Дългата квадратна форма и магнитът улесняват интегрирането в съществуващата ви експериментална настройка.
И тогава имаФилтър JF011E. Този филтър има уникален дизайн, който осигурява отлични оптични характеристики. Той може точно да контролира предаването на светлина, което ви позволява да оптимизирате откриването на целевия ви флуорофор, като същевременно намалява смущения от флуоресценция на фона.
В допълнение към използването на нашите филтри, също така е важно да оптимизирате вашите експериментални условия. Например, можете да регулирате концентрацията на вашата проба, за да намалите фоновата флуоресценция. Понякога разреждането на пробата може да помогне, но трябва да внимавате да не я разреждате твърде много и да повлияете на сигнала от целевия ви флуорофор. Можете също така да опитате да промените дължините на вълните на възбуждане и емисии, за да намерите оптималните настройки, които да сведат до минимум флуоресценцията на фона и да увеличите максимално сигнала от вашата цел.
Друго предизвикателство е възпроизводимостта на корекцията. Различните проби могат да имат различни нива и източници с висока флуоресценция на фона. Това означава, че методът за корекция, който работи добре за една проба, може да не работи толкова ефективно за друга. От решаващо значение е да се разработи стандартизиран протокол за коригиране на вътрешния ефект на филтъра в проби с висока флуоресцентна флуоресценция. Нашият екип от експерти може да работи с вас, за да разработи такъв протокол въз основа на вашите специфични проби и експериментални изисквания.
Цената също може да бъде фактор. Някои усъвършенствани техники за корекция или високи филтри могат да бъдат доста скъпи. В нашата компания разбираме ограниченията на бюджета, с които се сблъскват много изследователи и лаборатории. Ето защо ние предлагаме нашите вътрешни филтри на конкурентни цени, без да се компрометира качеството. Вярваме, че всеки трябва да има достъп до надеждни решения за справяне с предизвикателствата на високата флуоресценция на фона и ефекта на вътрешния филтър.
В заключение, коригирането на ефекта на вътрешния филтър в проби с висока флуоресценция на фона е сложна задача с много предизвикателства. Но с правилните инструменти и опит, това определено е постижимо. Нашите вътрешни филтри, катоВъншен филтър DF727 Предаване,DTF630 - 0025 - АМ вътрешен филтър дълъг квадрат с магнит 1726302DT000 DTF630 трансмисияиФилтър JF011E, са предназначени да ви помогнат да преодолеете тези предизвикателства и да получите точни, надеждни данни от вашите тестове, базирани на флуоресценция.
Ако се борите с висока флуоресценция на фона и ефекта на вътрешния филтър във вашите проби, не се колебайте да се свържете с нас. Тук сме, за да ви помогнем да намерите най -добрите решения за вашите специфични нужди. Независимо дали имате въпроси относно нашите продукти, имате нужда от съвет относно експерименталния дизайн или искате да обсъдите персонализирано решение, ние сме просто съобщение. Нека работим заедно, за да изведем вашите изследвания на следващото ниво.
ЛИТЕРАТУРА
- Lakowicz, JR (2006). Принципи на флуоресцентна спектроскопия. Springer Science & Business Media.
- Valeur, B. (2002). Молекулярна флуоресценция: Принципи и приложения. John Wiley & Sons.
